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簡要描述:基因擴增實驗又稱PCR實驗,其特點是能將微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法,廣泛應用于生物學各個領域,例如:Hiv病檢測、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測和診斷,DNA指紋、個體識別、親子鑒定及法醫(yī)物證,動、植物檢疫,動物及其衍生產(chǎn)品檢測,動物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測,轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等。醫(yī)院病理科PCR實驗室設計規(guī)劃新建擴建改造
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詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 產(chǎn)地類別 | 國產(chǎn) |
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應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,食品,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
醫(yī)院病理科PCR實驗室設計規(guī)劃新建擴建改造
PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設有走廊,各工作區(qū)域應設緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的,各工作區(qū)有明顯的標志,不能直通,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。
前兩區(qū)為擴增前區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū),擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),即從試劑準備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)頂部應安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。
1、樣本間交叉污染:
收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴外溢;不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖;移液器等實驗器具及耗材未及時消毒滅菌;不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復吹吸導致氣溶膠形成擴散,相互交叉污染。
2、實驗試劑污染:
主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中,由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。 加樣過程中,因為 PCR 試劑對溫度十分敏感,需要通過冰浴使得 PCR 試劑和 PCR 板/管處于 0℃,但這個過程也是充滿了污染的風險的。
3、擴增產(chǎn)物污染:
大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴增后的PCR反應管意外開蓋,這是 PCR 反應中主要zui常見的污染問題。因為 PCR 產(chǎn)物拷貝量大,遠遠高于 PCR 檢測數(shù)個拷貝的極限,所以極微量的 PCR 產(chǎn)物污染,就可形成假陽性。
4、克隆質(zhì)粒污染:
作為陽性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。
按照實驗室的安全工作制度或安全標準操作程序,所有操作符合《實驗室生物安全通用要求》(GB19489-2008)。
5、嚴格執(zhí)行各區(qū)功能劃分:
試劑儲存和準備區(qū):貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應混合液的準備,以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。
標本制備區(qū):核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管。對于涉及臨床樣本的操作,應符合生物安全二級實驗室防護設備、個人防護和操作規(guī)范的要求。
擴增區(qū):cDNA合成、DNA擴增及檢測。
擴增產(chǎn)物分析區(qū):擴增片段的進一步分析測定,如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。
試劑準備區(qū)、樣本制備區(qū)和擴增區(qū)內(nèi)的實驗用品,包括移液器等器具應,空氣、物品流向依次為:試劑準備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū),不可逆行。
6、清潔的實驗用品:
實驗室自配試劑(去離子水、緩沖液等)和所有使用器具在使用之前均應高壓滅菌或紫外殺菌。槍尖、反應管等實驗耗材應一次性使用。
7、正確的實驗操作:
實驗應在超凈工作臺內(nèi)進行,工作臺內(nèi)應放置PCR的微量離心機、各量程的移液器和其他必須物品。
實驗的過程中選擇合適尺寸的手套并能及時更換,在進出不同實驗區(qū)域或進行模板操作后都應更換實驗服、帽子及手套,以避免不同實驗區(qū)交叉污染。
裝有PCR試劑的反應管在打開之前應先瞬時離心,將管壁及管蓋上的液體離至管底,降低污染手套或加樣器的風險;謹慎開啟反應管,防止管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠導致污染。
吸加試劑和模板的操作應嚴格按照規(guī)范要求進行,遵守“慢吸快打"原則,盡量一次性完成,忌多次抽吸,以避免氣溶膠產(chǎn)生的交叉污染。
PCR試劑建議小量分裝,以減少反復凍融、重復取樣次數(shù);多樣本PCR反應時,先配制反應混合液分裝至反應管中,后加入樣本核酸,請勿同時開蓋,盡量保證單人單管,實現(xiàn)*閉管操作。
實驗試劑應與樣品和PCR產(chǎn)物分開保存,不應放于同處。
PCR擴增實驗完成后及時將反應管取出,用一次性手套將產(chǎn)物反應管包裹丟棄,保證管蓋緊閉。
8、規(guī)范的實驗設計:
應遵循實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制的相關規(guī)定,實驗中設立陽性對照、陰性對照和空白對照,全程質(zhì)控實驗過程,驗證PCR反應的可靠性,并協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性。
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